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    發布日期:2024/3/21 9:31:00

    做實驗,細胞鋪勻是常見的一種。然而,有許多人不是很成功,分布也不均勻:要么中間密集,周圍稀疏,要么周圍密集,中間禿頂。以下是利用96孔板把細胞鋪勻,希望對大家有用!

    方法/步驟

    1、通常,在96孔板的每個孔中加入100微升細胞懸浮液。 從底部附近的井的左側添加細胞懸浮液。 加入一半平板后,混合細胞懸液,不要再加入,繼續加入剩余的一半平板。 添加完所有板后,蓋上板,用左手輕輕握住板的左側,用右手輕輕輕敲板的右邊緣,注意抓力(我通常輕敲三次)。 如果它太強或太多次,細胞就會被濃縮和堆積。 順時針旋轉盤子(逆時針效果不好),依次敲擊剩余的三面,靜置約5分鐘,放入37度培養箱中。

    對于6孔板、12孔板或24孔板,我在第一個孔中加入少量無血清培養基,搖動并滲透到整個孔的底部,然后用移液管槍將整個孔的底部吸到第二個孔中。用同樣的方法滲透到井底,同時模擬其它井,這樣整個井底都是濕的,細胞懸浮液將平放在整個井底。 加入細胞懸液時,可以避免中間加入更多細胞,中間加入更少細胞的現象,細胞分散更均勻。 注意,加入細胞懸液后,細胞懸液應放在工作臺上靜置。這個方法有點慢,但是當你熟練的時候它并不慢。也可以涂抹,但強度不如96孔板,效果不如96孔板,所以我放棄了滲透井底的方法。

    2、加入細胞懸液后,抬起細胞培養板,從底部向上觀察光線,看細胞是否聚集。然后從底部敲擊以分散它。

    3、如果實驗室有平板振蕩器,建議用這個儀器輕微振蕩。 效果好,即振幅小、頻率高。

    4、細胞應該盡可能分散,大多數細胞處于單一狀態。離心后,完全懸浮!有轉移到六孔板上的,就是震動!搖晃時,不要讓細胞液轉向,否則細胞會全部被帶到中間而不均勻!

    5、當一瓶細胞裝滿后,進行正常處理。 將它均勻地吹進培養瓶中,然后鋪上6孔板,每孔2ml。 涂抹后,不用觀察直接用酒精棉擦拭,然后放入培養箱中。 稍微向左三圈,向右三圈,先三圈,然后三圈?;旧?,24小時后,每個孔中的細胞將非常均勻。

    6、計算所有所需的液體和細胞數量,混合均勻,并將其添加到六孔板中。 六孔板呈水平8字形波動。 在顯微鏡下觀察。 如果不均勻,按照上述方法再次搖動。如果細胞沒有計數并直接種植,在種植六孔板的過程中隨時搖動混合瓶。 我通常順時針或逆時針轉動瓶子。

    7、先上下移動,然后在水平板上左右移動,每個方向移動5-6次,但關鍵是搖動后直接放入培養箱,不要做太多的運動,如照鏡子,否則很容易在中間再次聚在一起。

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